百迪成骨誘導(dǎo)分化+染色試劑盒Kit
- 品名： 百迪成骨誘導(dǎo)分化+染色試劑盒Kit
- 型號： S1021-KIT
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品信息
| 適用范圍 | 試劑 |
|---|---|
| 使用方法 | 1. MSC 成骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基配制：室溫融化成骨誘導(dǎo)添加物 B，將融化的溶液加入人間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻，2-8 ℃保存，有效期 1 個月。 2. 培養(yǎng)皿處理：加適量包被溶液到培養(yǎng)器皿中，輕輕搖動使其覆蓋整個培養(yǎng)器皿底面，室溫靜置30-60分鐘。棄去溶液 ，室溫晾干（包被液使用前必須進(jìn)行室溫復(fù)溫。建議使用六孔板，每孔加包被溶液1 ml）。 3. 準(zhǔn)備所需誘導(dǎo)分化的 MSC，當(dāng)細(xì)胞融合達(dá) 85%左右時，用消化液消化細(xì)胞，并用 MSC 完全培養(yǎng)基重懸（MSC 完全培養(yǎng)基需自備）。 4. 按照2×104 cells/cm2的密度將細(xì)胞接種于已包被處理的六孔板中，每孔MSC完全培養(yǎng)基2 ml，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（細(xì)胞密度為該試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)密度，可根據(jù)實(shí)驗室情況進(jìn)行調(diào)整）。 5. 當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)60%時，棄去培養(yǎng)上清，每孔添加MSC成骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基2 ml/孔，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 6. 每3天更換新鮮的MSC成骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基，持續(xù)培養(yǎng)2-4周。細(xì)胞狀態(tài)良好一般5天后培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁，鈣渾濁為鈣開始沉積，此時換液應(yīng)盡量輕柔，避免將沉積的鈣棄掉；7-10天左右出現(xiàn)鈣沉積。一般2周內(nèi)出現(xiàn)較大的較厚的鈣沉積，透光性變差。有些細(xì)胞鈣沉積出現(xiàn)較晚，一般不超過3周，超過3周未出現(xiàn)明顯沉積，請注意分析操作步驟與其他原因?？筛鶕?jù)具體實(shí)驗需求選擇終止時間，但不易超過4周（具體時間請根據(jù)自己實(shí)驗室細(xì)胞等條件自行確定）。 7. 誘導(dǎo)培養(yǎng)結(jié)束時，棄去培養(yǎng)上清，DPBS洗細(xì)胞兩次，4%中性多聚甲醛溶液2 ml/孔室溫固定細(xì)胞20分鐘（培養(yǎng)結(jié)束時或中途可以選擇其他檢測方法，如基因表達(dá)檢測等）。 8. 棄去固定液，DPBS洗2次，加入茜素紅染液1 ml/孔染色15分鐘。 9. 棄去茜素紅染液，DPBS洗3次，添加新鮮DPBS。 10. 顯微鏡下觀察并拍照。 11. 結(jié)果判定：按照程序操作完畢，低倍鏡下觀察可見紅色著色點(diǎn)，此處為鈣結(jié)節(jié)，說明實(shí)驗所用的MSC具有成骨能力。否則，所使用的MSC無成骨能力。 |
| 注意事項 | 1、 成骨誘導(dǎo)后細(xì)胞易脫壁，換液時完全培養(yǎng)基必須經(jīng)室溫復(fù)溫 30 分鐘。添加培養(yǎng)基時動作要輕柔，沿培養(yǎng)器皿側(cè)壁緩緩加入，切記避免吹起細(xì)胞。 2、 染色過程中一定要避免組織細(xì)胞被風(fēng)干，風(fēng)干會影響顯微觀察效果。 3、 如果試劑外包裝管出現(xiàn)裂縫，應(yīng)立即停止使用。 4、 應(yīng)嚴(yán)格按照貯存要求貯存，避免反復(fù)凍融。 5、 操作過程應(yīng)在無菌環(huán)境下進(jìn)行。必須保證操作過程中使用的所有容器及所有直接接觸細(xì)胞液的器具嚴(yán)格無菌。 |
| 聲明 | 僅用于科研使用，不能用于臨床診斷和治療。 |
| 保存條件 |
產(chǎn)品詳情
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）具有多向分化的潛能，在一定條件下可以體外誘導(dǎo)分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞，是 MSC 鑒定的必檢項目，在多種組織來源和制作方法的 MSC 藥品質(zhì)量控制中，成骨、成脂、成軟骨也是必檢指標(biāo)。BDBIO 成骨誘導(dǎo)分化染色試劑盒可用于鑒定人 MSC 是否具有成骨分化能力，滿足 MSC 質(zhì)量控制的要求，此外在再生醫(yī)學(xué)和組織工程研究中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基也可作為除支架以外的培養(yǎng)體系。誘導(dǎo)培養(yǎng)基還可用于研究誘導(dǎo)分化過程中的其他檢測，如 mRNA 檢測、lncRNA 檢測、microRNA 檢測、蛋白表達(dá)檢測、鈣沉積量檢測、免疫組化檢測等。
暫無內(nèi)容...
