| E.coli BL21來(lái)源于B株，為lon蛋白水解酶、ompT外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表達(dá)的外源蛋白質(zhì)在該體系中具有更高的穩(wěn)定性。本制品有利于外源蛋白質(zhì)的穩(wěn)定表達(dá)。本制品可用于pCold I-IV DNA 和pCold TF DNA的蛋白質(zhì)表達(dá)，但不適合于啟動(dòng)子為T7的蛋白質(zhì)表達(dá)體系，如pET系列，因?yàn)锽L21宿主不表達(dá)T7 RNA聚合酶。另外，不建議使用此菌株構(gòu)建或制備質(zhì)粒，因?yàn)樗皇莚ecA基因缺失型菌株。注意：本制品不可用于電擊法轉(zhuǎn)化。 ■ 保存-80℃。注意：如果不是-80℃保存，轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低?？墒褂酶綆У膒UC19 DNA確認(rèn)保存細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。 ■ 質(zhì)量控制轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 DNA，涂于含有Amp+的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。轉(zhuǎn)化效率 : ≥1×106 colonies /μg pUC19 DNA ■ GenotypeE.coli BL21: F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm ■ 注意事項(xiàng)1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80℃冷凍取出后請(qǐng)立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。2. 當(dāng)使用100 μl感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，加入不超過(guò)10 ng的高純度質(zhì)粒DNA。否則轉(zhuǎn)化效率會(huì)降低。3. 當(dāng)改變感受態(tài)細(xì)胞數(shù)量或tubes類型時(shí)，適當(dāng)調(diào)整反應(yīng)條件。4. 使用TE buffer溶解純化的質(zhì)粒DNA。DNA溶液如果鹽濃度高，可能會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基。此時(shí)，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低。 ·L-broth :Ingredientper liter water Tryptone10 g Yeast extract5 g NaCl5 g 用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。 ·φb-broth:Ingredientper liter water Tryptone20 g Yeast extract5 g MgSO4·7H2O5 g 用1 N KOH調(diào)整pH到7.5并高壓滅菌。6. 稀釋時(shí)，使用SOC培養(yǎng)基。7. 不建議將解凍的感受態(tài)細(xì)胞再次冷凍保存。但是，如果再次凍結(jié)不可避免，將細(xì)胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍，置于-80℃保存。但是，轉(zhuǎn)化效率可能會(huì)降低至少一個(gè)數(shù)量級(jí)。 |
