- 品名： TaKaRa 一步法RNA反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增試劑盒（AMV）
- 品牌： TaKaRa
- 型號(hào)： RR024B
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)
商品編號(hào)：SPU2021050499
上架時(shí)間：2022-01-06
| ■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR024A : 50 次量) |
| AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl)50 μlRNase Free dH2O1 ml × 2 支RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μlAMV-Optimized Taq (5 U/μl)50 μl10X One Step RNA PCR Buffer250 μldNTP Mixture (各10 mM)250 μlMgCl2 (25 mM)500 μlControl F-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用上游引物)25 μlControl R-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用下游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)25 μl *1：各種引物序列 |
| 引物名稱各引物序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
| *2：本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動(dòng)子下游插入長(zhǎng)約1.4 kb的pBR322來(lái)源的DNA片段，其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。 |
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| 圖1. Positive Control RNA：進(jìn)行Control實(shí)驗(yàn)時(shí)所能擴(kuò)增的DNA片段 |
| ■ 制品說(shuō)明 |
| PCR (Polymerase Chain Reaction；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種體外擴(kuò)增DNA的簡(jiǎn)單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA，RNA不能直接被擴(kuò)增，但是經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前，此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。本試劑盒采用了一步反應(yīng)法 (One Step法) 完成RT-PCR反應(yīng)。RNA→cDNA→PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行，反應(yīng)中途不需添加任何試劑，就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來(lái)的反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再由AMV-Optimized Taq (根據(jù)LA PCR技術(shù)研制) 擴(kuò)增cDNA的全部反應(yīng)。常規(guī)RT-PCR試劑盒采用2 step PCR進(jìn)行連續(xù)反應(yīng)，并分別配制反應(yīng)液，這些操作增加了污染的可能性，而本試劑盒可降低污染，并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本試劑盒中含有進(jìn)行One Step法RT-PCR反應(yīng)用的全部試劑，可以簡(jiǎn)便而有效地對(duì)RNA進(jìn)行擴(kuò)增分析。 |
| ■ 保存 |
| -20℃。 |
| ■ One Step RT- PCR的原理 |
| TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反應(yīng)管中完成由AMV 反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再使用AMV-Optimized Taq擴(kuò)增此cDNA的RT-PCR反應(yīng)。 |
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| 圖2. One Step RT-PCR原理圖 |
| ■ 特點(diǎn) |
| RNA模板 適用于所有RNA 擴(kuò)增片段大小 ～5.6 kb 反轉(zhuǎn)錄酶 AMV Reverse Transcriptase XL (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度在42℃～60℃) 反轉(zhuǎn)錄引物 特異性下游引物(PCR擴(kuò)增反應(yīng)用反義鏈引物)（不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer） DNA Polymerase AMV-Optimized Taq RNase Inhibitor Kit中含有 操作 在同一反應(yīng)管中連續(xù)進(jìn)行 (PCR反應(yīng)前加熱使RTase失活) |
| ■ 注意事項(xiàng) |
| 1. 當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時(shí)，應(yīng)先配制各種試劑的混合液(Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等)，然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣，可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確，減少試劑損失，避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。 2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶類時(shí)，應(yīng)輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出，使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好保存于-70℃～-80℃。 5. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。 6. 使用本試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)必須使用特異性的反轉(zhuǎn)錄引物，Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。 |
| TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | RR024A | TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | 50次 |
| Takara | RR024B(A×2) | TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV) | 100次 |
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